【概要描述】须结合细胞种类和培养工艺特点,确定核心性能需求,选择最适宜的微载体产品。
【概要描述】须结合细胞种类和培养工艺特点,确定核心性能需求,选择最适宜的微载体产品。
【前言】
微载体是直径50-300微米,密度略大于水,表面可供贴壁细胞贴附生长的微珠材料;与传统二维基质材料相比具有高比表面积。在同等规模的培养容器内可培养更多数量的细胞,更可搭配生物反应器实现细胞的规模化悬浮培养,极大节约人力、物力、空间成本。
细胞在3D TableTrix® 微载体上贴附生长示意
目前,国内外市场累计有超过40款微载体产品。面对琳琅满目的市售微载体产品,您是否感到眼花缭乱、难以挑选呢?本文将梳理市售微载体分类,为您做出选择提供参考。
【Part1 按形貌分类】
目前,由于球形微米级颗粒制备技术较为成熟,绝大多数市售微载体均为球形颗粒,且粒径分布多在50-300微米范围内,密度略大于水,以便于在生物反应器体系内均匀分散。在球形形状基础上,又可分为实心球型和多孔球型。
实心球型微载体仅外表面供细胞贴附,易使细胞贴壁、铺展,更有利于病毒生产时感染。但细胞贴附在外表面,会直接承受流体剪切力、球间碰撞等有害动力学因素影响,相当于“硬碰硬”。
实心球载体与多孔球型载体的碰撞对比示意
多孔球型微载体可容纳细胞在其内部孔壁贴附,提供了更大的可贴附表面积,利用单位体积培养基可扩增的细胞数量上限更高,有助于提高细胞培养质效,同时可保护细胞免受动力学因素损伤。
因此,贴附在实心球型微载体表面的细胞就像生活在空无一物的“平面”上;而贴附在多孔球型微载体孔壁的细胞则像是生活在“蜂巢”中。两相对比,“蜂巢”不仅具有更高的容积率,而且“遮风挡雨”的能力往往也更胜一筹.
【Part2 按材质分类】
微载体形貌决定了细胞生活的基础。除了“房型”以外,环境也很重要。对于细胞来说,最舒适的莫过于体内由细胞外基质支撑的环境。因此,微载体的核心目标就是构建仿生细胞外基质环境。
需要注意的是,来自不同组织、器官的不同种类细胞,其偏好的环境不同;不同种类细胞耐受体外非仿生培养环境的能力也各不相同。
传统微载体多采用多糖或合成高分子制成,表面携带增强电荷以吸附细胞贴附,因而细胞贴附速率快、贴附牢固。然而,多糖或合成高分子材质难以提供仿生环境,适用细胞类型有限;另外,这类微载体多不可降解,不利于细胞收获,多用于病毒生产等无需收获细胞的应用场景。
还可通过细胞外基质成分包被多糖或合成高分子微球表面,制成微载体,这类微载体具有仿生表面供细胞贴附。市售微载体常采用一款微载体内核+多款定制化包被材料的产品家族模式,适用于包括间充质干细胞、多能干细胞在内的各类细胞。然而,这类微载体的多糖或合成高分子内核往往不可降解,一定程度上限制了其工业放大潜力。
3D RecomTrix® 重组胶原微载体材质&结构示意
实际上,可以完全采用细胞外基质成分——明胶或胶原蛋白——制备微载体。明胶或胶原蛋白微载体,不仅具有仿生表面,在力学性能方面也更接近天然组织、器官的硬度和粘弹性;并且可降解,有利于收获细胞。因此常被用于培养对仿生环境和收获方式要求较高的各类干细胞。
【Part3 按可降解性分类】
微载体作为细胞在体外临时的“家”,不仅要保证细胞在家里舒适居住,还要保证细胞离开家后仍然健康生活。因此细胞收获方式至关重要。
如上文所述,含多糖或合成高分子材质的微载体多不可降解,贴附在这类微载体表面的细胞,一般需由蛋白酶消化收获,有损伤细胞风险。特别是表面携带增强电荷的微载体,由于静电相互作用影响,需要较强的酶消化强度和时间,而且尚不能保证细胞完全消化下来,导致较大的细胞损失和细胞损伤。
另外,不可降解微载体往往需梯度离心或过滤方法才能去除,期间难免细胞损失,且增加了生产成本和复杂性。若未除净,微载体残留还会对后续细胞制品带来安全隐患。
3D微载体降解过程示意
因此,可降解微载体应用趋势与日俱增。采用更为温和的消化方法,快速降解微载体并收获细胞,既能减少细胞损伤,还能免去分离微载体之苦,实现温和、高效收获。目前,市售可降解微载体主要是明胶或胶原蛋白材质的微载体,可被传统蛋白酶消化法或专用裂解液降解。
【总结】
市售微载体产品尽管琳琅满目,但以上述几项核心性能为线索梳理,其分类则十分清晰。须结合细胞种类和培养工艺特点,确定核心性能需求,选择最适宜的微载体产品。
● 两项中国CDE资质,备案号:F20200000496、F20210000003
●三项美国FDA资质,备案号:DMF Ⅱ型:037798DMF Ⅳ型:035481MF Ⅱ型:29721
●获中检院与第三方权威检测机构复核检验报告中检院报告编号:SH202311161
第三方检测报告:检字<2023>012302052号
尊龙凯时 - 人生就是搏!生物3D TableTrix® 及3D RecomTrix® 系列微载体,均为多孔球形结构,比表面积大,均一度高,大幅提高细胞培养质效;原料为明胶或重组胶原蛋白,可提供弹性仿生环境;配合特异性降解技术,可温和收获细胞,实现真正的3D仿生培养,正是细胞培养首选。
【尊龙凯时 - 人生就是搏!生物】
北京尊龙凯时 - 人生就是搏!生物科技有限公司成立于2018年,由清华大学医学院杜亚楠教授科研团队领衔创建,清华大学参股共建。核心技术源于清华大学科技成果转化,并凭借此项技术荣登中国科协“科创中国”先导技术榜。作为国家级高新技术企业、国家级专精特新“小巨人”企业、潜在独角兽企业,更获得国家科技部多项重点研发专项支持。
作为高质量三维细胞制造专家,尊龙凯时 - 人生就是搏!生物提供基于3D微载体的一站式定制化细胞规模化扩增整体解决方案,打造了原创3D细胞智造平台,实现规模化、自动化、智能化、密闭式的细胞药物及其衍生品生产制备,以此帮助全球客户建立最为先进的细胞药物生产线。在开创【百亿量级】干细胞制备工艺管线后,加速向【千亿量级】进发,致力于以3D细胞规模化智造技术赋能细胞与基因治疗产业,惠及更多患者。
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